RetroBeads™逆行熒光示蹤劑

產(chǎn)品描述：

Lumafluor公司 RetroBeads™ 是逆向示蹤領域的原裝微球，也是經(jīng)實驗驗證高效可靠的微球產(chǎn)品。綠色和紅色熒光 RetroBeads™ 僅由 Lumafluor 供應。穩(wěn)定、可靠的逆向示蹤，唯有Lumafluor RetroBeads™ 是您的優(yōu)選。

Lumafluor RetroBeads™ 核心優(yōu)勢：

1）高度精準注射—特別適用于精細神經(jīng)連接研究

2）胞內(nèi)長期穩(wěn)定存在（> 1年）且無毒副作用

3）兼容性強：可與多數(shù)順行示蹤劑、原位雜交及免疫組化技術聯(lián)用

操作流程：

【產(chǎn)品說明】

1.包裝形式：蒸餾水懸浮濃縮液。

2.紅色微球：

1）可直接使用或稀釋。

2）大鼠視覺皮層實驗顯示1:4稀釋不影響標記效果。

3）初次實驗建議使用原液。

4）可用蒸餾水或標準鹽溶液（NaCl/KCl）稀釋。

3.綠色微球

1）即用型制劑

2）禁止稀釋

【儲存條件】

1.冷藏保存于加濕容器中（防蒸發(fā)）

2.嚴禁冷凍（會導致持久性失效）

3.干燥后不可復溶

4.正確儲存條件下有效期可達數(shù)年

【注射方法】

1.推薦方式：

1）壓力注射（如1mL漢密爾頓注射器）

2）局部神經(jīng)環(huán)路：30-50納升（30-50μm玻璃微量注射器）

3）常規(guī)逆行示蹤：0.1-0.3微升（大口徑針頭）

2.擴散特性：

1）注射點擴散范圍<1mm

2）大范圍標記需多點注射

3）不推薦電離子透入法（微珠帶凈負電荷）

【存活時間】

1.溫血脊椎動物：

1）最短有效標記時間：24小時

2）48小時內(nèi)標記強度遞增，此后保持穩(wěn)定。

2.冷血動物：建議初始存活時間設為1周。

3.最長存活期：未明確，但14個月后標記仍穩(wěn)定，推測為持久性標記。

4.無毒性：未發(fā)現(xiàn)對動物或神經(jīng)元的毒性效應。

【固定與處理】

1.標準固定流程：

1）0.1 M磷酸緩沖液沖洗

2）4%多聚甲醛（0.1 M磷酸緩沖液，pH 7.4）固定

2.避免戊二醛：會引發(fā)組織自發(fā)熒光，干擾標記（綠色微球在戊二醛固定后不可見）。

3.切片處理：

1）冰凍切片收集于磷酸緩沖液，貼附于明膠包被載玻片，空氣干燥。

2）充分干燥后，二甲苯透明1分鐘，封片（推薦Fluoromount或Krystalon）。

4.注意事項：

1）短時間（<5分鐘）接觸酒精或二甲苯無害，但長時間會破壞微球。

2）嚴禁甘油：微球?qū)Ω视兔舾?，會快速褪色（可改用水楊酸甲酯）?/span>

3）避光保存時，標記可穩(wěn)定1年以上（但背景熒光可能增強）。

4）塑料包埋后無法保留標記。

【觀察方法】

1.紅色微球：

染料為羅丹明，適用任何羅丹明熒光濾光片（部分舊款尼康濾光片背景較高，推薦蔡司或徠卡標準濾光片）。

2.綠色微球：

適用寬波段熒光素濾光片（窄波段信號較弱，Lucifer Yellow濾光片背景較高）。

3.抗光漂白：長時間觀察或顯微攝影無明顯褪色。

4.鏡頭選擇：

1）低倍干鏡（如4×、10×）通常無法清晰觀察標記。

2）推薦使用10×油鏡（NA ≥ 0.4）或更高倍鏡，25×油鏡可顯著提升綠色微球標記的清晰度。

3）實驗失敗判斷前，請用油鏡檢查注射位點附近切片（應存在大量局部標記細胞）。

綠色微球特別提示

1.年齡影響：

幼年動物標記轉(zhuǎn)運效率更高，組織自發(fā)熒光更低，建議優(yōu)先選用。

2.降低自發(fā)熒光：

1）使用更薄切片（如30 μm而非40-50 μm）。

2）選用幼年動物。

3）封片后盡快觀察（背景熒光隨時間增強）。

產(chǎn)品訂購：

更多產(chǎn)品信息，請垂詢Lumafluor中國區(qū)總代理北京博蕾德生物科技有限公司。